Sérologické reakce: druh, použití

Laboratorní diagnostika prakticky všech infekčních onemocnění je založena na detekci protilátek v krvi pacienta, které jsou vyvinuty pro antigeny patogenu metodami sérologických reakcí. Do lékařské praxe vstoupili od konce devatenáctého - počátku dvacátého století.

Vývoj vědy pomohl určit antigenní strukturu mikrobů a chemické vzorce jejich toxinů. To umožnilo vytvořit nejen terapeutické, ale i diagnostické sérum. Jsou získávány zavedením oslabených patogenů do laboratorních zvířat. Po několika dnech expozice z krve králíků nebo myší se přípravky používané k identifikaci mikrobů nebo jejich toxinů připravují za použití sérologických reakcí.

Externí projev takové reakce závisí na podmínkách jeho formulace a na stavu antigenů v krvi pacienta. Pokud jsou částice mikroorganismů nerozpustné, pak se vysrážejí, lyžují, vázají nebo imobilizují v séru. Pokud jsou antigeny rozpustné, objevuje se fenomén neutralizace nebo vysrážení.

Aglutinační reakce (PA)

Sérologická reakční aglutinace je vysoce specifická. Je to jednoduché provedení a je dostatečně jasné, aby rychle zjistilo přítomnost antigenů v séru pacienta. Používá se k potvrzení reakce přípravku Vidal (diagnóza tyfusu a paratyfoidu) a přípravku Veigl (tyfus).

Je založen na specifické interakci mezi lidskými protilátkami (nebo aglutininy) a mikrobiálními buňkami (aglutinogeny). Po jejich vzájemném působení se vytvářejí částice, které se vysráží. To je pozitivní znamení. Pro formulaci reakce jsou živé nebo usmrcené mikrobiální činidla, houby, prvoky, krvinky a somatických buněk.

Chemicky je reakce rozdělena do dvou fází:

1. Specifická sloučenina protilátek (AT) s antigeny (AH).
2. Nešpecifická - srážení konglomerátů AG-AT, tj. Tvorba aglutinátu.

Nepřímá aglutinační reakce (RPHA)

Tato reakce je citlivější než předchozí. Používá se k diagnostice nemocí způsobených bakteriemi, intracelulárními parazity, protozoá. Je tak specifická, že dokáže detekovat i velmi nízkou koncentraci protilátek.

Abychom ji vyrobili, používáme vyčištěné jehněčí jehňata a červené krvinky člověka, který je předem ošetřen protilátkami nebo antigeny (záleží na tom, co chce laboratorní technik najít). V některých případech jsou lidské erytrocyty léčeny imunoglobulinem. Sérologické reakce erytrocytů jsou považovány za uskutečněné, pokud se ukládají na dno zkumavky. Pozitivní reakci lze říci, když jsou buňky uspořádány ve formě invertovaného deštníku, který zabírá celé dno. Negativní reakce se počítá, pokud se červené krvinky usadily ve sloupci nebo ve formě tlačítka ve středu dna.

Srážková reakce (RP)

Sérologické reakce tohoto typu slouží k detekci extrémně malých částic antigenů. Mohou to být například proteiny (nebo jejich části), proteinové sloučeniny s lipidy nebo uhlohydráty, části bakterií a jejich toxiny.

Séra pro reakci se získají umělou infekcí zvířat, obvykle králíků. Tato metoda může získat absolutně jakékoliv vysrážené sérum. Zastavení sérologických srážecích reakcí je podobné mechanismu účinku na aglutinační reakci. Protilátky obsažené v séru se kombinují s antigeny v koloidní roztok, tvořící velké molekuly bílkovin, které jsou uloženy na dně zkumavky nebo na substrát (gel). Tato metoda je považována za vysoce specifickou a může odhalit i zanedbatelné množství látky.

Používá se k diagnostice mor, tularemie, antraxu, meningitidy a dalších nemocí. Kromě toho je zapojen do forenzní lékařské prohlídky.

Srážková reakce gelu

Sérologické reakce se mohou provádět nejen v kapalném prostředí, ale také v agarovém gelu. Toto se nazývá difúzní srážení. S jeho pomocí se studuje složení komplexních antigenních směsí. Tato metoda je založena na chemotaxii antigenů na protilátky a naopak. V gelu se pohybují směrem k sobě různými rychlostmi a při setkávání vytvářejí srážkové linie. Každý řádek je jedna sada AG-AT.

Reakce neutralizace exotoxinu s antitoxinem (PH)

Antitoxické sérum je schopno neutralizovat účinek exotoxinu, který produkuje mikroorganismy. To je základ těchto sérologických reakcí. Mikrobiologie používá tuto metodu pro titraci sér, toxinů a toxoidů, stejně jako určuje jejich terapeutickou aktivitu. Neutralizace toxinu je určována konvenčními jednotkami - AE.

Kromě toho je možné vzhledem k této reakci určit druh nebo typ příslušného exotoxinu. To se používá při diagnostice tetanu, záškrtu, botulismu. Studie může být provedena jak na skle, tak v gelu.

Lysis reakce (RL)

Imunní sérum, které vstupuje do těla pacienta, má vedle své hlavní funkce pasivní imunita, také vlastnosti pro lýzu. Je schopen rozpustit mikrobiální látky, buněčné cizí prvky a viry, které vstupují do těla pacienta. V závislosti na specificitě séra obsahujícího protilátky jsou izolovány bakteriolysiny, cytolyziny, spirohetholyziny, hemolyziny a další.

Tyto specifické protilátky se nazývají "komplement". Obsahuje téměř všechny tělesné tekutiny, má složitou proteinovou strukturu a je extrémně citlivý na horečku, třes, kyselinu a přímé sluneční světlo. Ale v suchém stavu je schopen udržet své vlastnosti pro lýzu po dobu až šesti měsíců.

Existují typy sérologických reakcí tohoto druhu:

- bakteriolýza;

- hemolýza.

Bakteriolýza se provádí s použitím krevního séra pacienta a specifického imunitního séra s živými mikroby. Pokud je v krvi dostatečné množství doplňku, výzkumník uvidí bakteriální lýzu a reakce bude považována za pozitivní.

Druhý krev sérologická odpověď je, že suspenze erytrocytů léčeného pacienta sérum obsahující hemolysins, které jsou aktivovány pouze v přítomnosti určitého kompliment. Jestliže je tam jeden, pak v laboratoři sledujeme rozpad červených krvinek. Tato reakce je široce používán v moderní medicíně pro stanovení titru komplementu (tj jeho nejmenší množství vyvolání lýzy červených krvinek) v krevním séru a k výrobě testu vazby komplementu. Takto se provádí sérologická odezva na syfilis - Wassermanova reakce.

Komplementární fixační reakce (RCC)

Tato reakce se používá k detekci protilátky proti infekčním činidlům v krevním séru pacienta a k identifikaci patogenu z jeho antigenní struktury.

Dosud jsme popsali jednoduché sérologické reakce. RSK je považována za složitou reakci, neboť interaguje ne se dvěma, ale se třemi prvky: protilátkou, antigenem a komplementem. Její podstatou spočívá ve skutečnosti, že interakce mezi protilátkou a antigenem probíhá pouze v přítomnosti doplňkových proteinů, které jsou adsorbovány na povrchu vytvořeného AG-AT komplexu.

Samotné antigeny po přidání doplňku procházejí významnými změnami, které ukazují na kvalitu reakce. Mohou to být lýza, hemolýza, imobilizace, baktericidní nebo bakteriostatický účinek.

Samotná reakce nastává ve dvou fázích:

1. Tvorba komplexu antigen-protilátka, který je pro výzkumníka vizuálně neviditelný.
2. Změna antigenu při působení komplementu. Tuto fázi lze často vysledovat pouhým okem. Pokud vizuální odezva není viditelná, použijte další systém indikátorů, který vám umožní zjistit změny.

Systém indikátorů

Tato reakce je založena na vazbě komplementu. Jednu hodinu po formulaci DSC se ke zkumavce přidávají purifikované ovčí erytrocyty a hemolytické sérum, které neobsahují komplement. Pokud nekonjugovaný doplněk zůstane ve zkumavce, spojuje se s komplexem AG-AT vytvořeným mezi skopovými buňkami krve a hemolyzínem a způsobí jejich rozpuštění. To znamená, že RCC je záporná. Pokud jsou červené krvinky neporušené, pak je reakce pozitivní.

Hemaglutinační reakce (RGA)

Existují dvě zásadně odlišné hemaglutinační reakce. Jeden z nich je sérologický, používá se k určení krevních skupin. V tomto případě interagují erytrocyty s protilátkami.

A druhá reakce se nevztahuje na sérologické, protože červené krvinky reagují s hemaglutininy produkovanými viry. Vzhledem k tomu, že každé činidlo působí pouze na specifické erytrocyty (kuře, jehněčí, opice), pak se tato reakce může považovat za úzce specifickou.

Pochopte pozitivní reakci nebo negativní, je to možné umístěním krevních buněk na dně zkumavky. Pokud se jejich obraz podobá na invertovaný deštník, pak je v krvi pacienta přítomen požadovaný virus. A jestliže všechny červené krvinky byly vytvořeny jako mincovní sloupec, pak nejsou žádné neznámé patogeny.

Reakce inhibice hemaglutinace (RTGA)

Jedná se o velmi specifickou reakci, která umožňuje určit typ, typ viru nebo přítomnost specifických protilátek v séru pacienta.

Jeho podstata spočívá v tom, že protilátky přidané do zkumavky obsahující zkušební materiál, zabraňuje ukládání antigenů na erytrocytech, čímž se zastaví hemaglutinaci. Jedná se o kvalitativní údaj o přítomnosti specifických antigenů v krvi na konkrétní požadované viru.

Reakce imunofluorescence (RIF)

Reakce je založena na schopnosti detekovat komplexy AG-AT fluorescenční mikroskopie po jejich ošetření fluorochromickými barvivy. Tato metoda je snadno ovladatelná, nevyžaduje přidělování čisté kultury a trvá jen málo času. Je nepostradatelná pro rychlou diagnostiku infekčních onemocnění.

V praxi se tyto sérologické reakce dělí na dva typy: přímé a nepřímé.

Přímý RIF se produkuje s antigenem, který je předem ošetřen fluorescenčním sérem. A nepřímý je to, že lék se nejprve zpracuje s konvenční diagnosticum obsahující protilátky proti požadovanému antigenu a potom znovu použity fluorescenční syrovátka, která je specifická k proteinům komplexu K-AT, a mikrobiální buňky stanou viditelné mikroskopicky.