Bakteriologická metoda výzkumu: etapy, cíle, charakteristiky

Studium bakterií má velký význam pro člověka. K dnešnímu dni bylo zjištěno velké množství prokaryot, které se navzájem liší patogenitou, distribucí, tvarem, velikostí, počtem parazitů a dalšími parametry. K podrobnějšímu studiu tohoto kmene se používá bakteriologická metoda.

Jaké jsou metody pro analýzu bakteriálních buněk?

K určení, zda jsou bakterie patogenní, je kultura testována různými způsoby. Mezi ně patří:

1. Bakterioskopická metoda.

2. Bakteriologická metoda.

3. Biologická metoda.

Bakterioskopické a bakteriologické výzkumných metod založeno na práci prokaryotické buňky, jako jsou biologické analýzy je zapotřebí prozkoumat dopad těchto buněk v živém organismu pokusných zvířat. Podle stupně manifestace tyto nebo jiné známky vědce onemocnění lze odvodit přítomnost nebo nepřítomnost patogenních bakterií ve vzorku, stejně jako jejich přirozeně se množí v těle zvířete pro jejich kultury a použít na jiném místě.

Bakteriologická metoda výzkumu se liší od bakterioskopické metody. V první je pro analýzu použita speciálně připravená kultura živých prokaryot, když druhá pracuje s mrtvými nebo živými buňkami na snímku.

Etapy bakteriologické metody vyšetřování. Mikrobiologie

Princip studiu vlastností bakteriální kultury může být užitečné pro mikrobiologové, vědci, kteří se vydávají prozkoumat prokaryotické buňky, jakož i pro laboratorní, jehož úkolem je stanovit patogenní nebo non-patogenní bakterie, a pak diagnózy pacienta.

Metoda studia bakterií je rozdělena do tří fází:

1. Izolace bakterií z původního vzorku.

2. Sejení bakterií a kultivace čisté kultury, studium jejích vlastností.

3. Podrobné studium bakteriálních buněk.

První fáze

Vzorek nebo nátěr se odebere z volného povrchu média nebo pacienta. Tak získáme "koktejl" z různých druhů bakterií, které musíme osetět na živné médium. Někdy je možné okamžitě identifikovat potřebné bakterie, protože je známo, že jsou v těle distribuovány.

Po dvou nebo třech dnech jsou požadované kolonie vybrány a naneseny na pevné médium Petriho misky pomocí sterilní smyčky. Mnoho laboratoří pracuje se zkumavkami, kde může být přítomno tuhé nebo tekuté živné médium. Stejně tak je bakteriologická metoda výzkumu v mikrobiologii.

Druhá fáze

Po získání jednotlivých kolonií bakterií se provádí přímé makro a mikroanalýza. Změří se všechny parametry kolonií, stanoví se barva a tvar každého z nich. Často se to provádí počítáním kolonií na petriho misce a poté ve výchozím materiálu. To je důležité při analýze patogenních bakterií, na jejichž počtu závisí stupeň onemocnění.

Bakteriologická metoda vyšetřování, jejíž druhá fáze je studovat jednotlivé kolonie mikroorganismů, může být spojena s biologickou metodou bakteriální analýzy. Dalším cílem práce v této fázi je zvýšit množství zdrojového materiálu. Může se provádět na živném médiu a v živých experimentálních organizmech je možné experimentovat in vivo. Patogenní bakterie se množí a v důsledku toho krev bude obsahovat miliony prokaryotických buněk. Z odebrané krve je snadné připravit potřebný pracovní materiál bakterií.

Třetí etapa

Nejdůležitější částí studie je stanovení morfologických, biochemických, toxigenních a antigenních vlastností bakteriální kultury. Práce se provádí s dříve "vyčištěnými" plodinami na živném médiu, stejně jako s preparáty (často zbarvenými) pod mikroskopem.

Identifikovat patogenní nebo podmíněně patogenní bakterie v určité systematické skupině a také určit jejich odolnost vůči léčivům, dovoluje bakteriologická metoda vyšetřování. Stupeň 3 - antibiotika, tj. Analýza chování bakteriálních buněk v podmínkách léčivých přípravků v prostředí.

Studium rezistence kultury na antibiotikum má velkou praktickou důležitost, když je nutné předepsat konkrétnímu pacientovi nezbytné a nejdůležitější účinné léky. Zde a bakteriologická metoda výzkumu mohou pomoci.

Co je živné médium?

Pro vývoj a reprodukci bakterií by měla být předem připravená živin. Podle konzistence mohou být tekuté nebo pevné a podle původu - rostlinné nebo živočišné.

Základní požadavky na živná média:

1. Sterilita.

2. Maximální průhlednost.

3. Optimální kyselost, osmotický tlak, aktivita vody a dalších biologických veličin.

Příprava izolovaných kolonií

1. Metoda Drigalskyho. Spočívá v tom, že bakteriální smyčka se aplikuje s rozetou s různými druhy mikroorganismů. Tato smyčka se provádí na první Petriho misce se živným médiem. Dále, bez změny smyčky, se metoda zbytkového materiálu provádí na druhé a třetí desce Petri. Takže na posledních vzorcích kolonie nebudou bakterie příliš osetěné, což zjednoduší možnost nalezení bakterií potřebných pro práci.

2. Metoda Koch. Používá trubky s roztaveným živným médiem. Pak se umístí smyčka nebo pipeta s nánosem bakterií, po kterém se obsah trubice nalije na speciální desku. Agar (nebo želatina) po určité době zmrzne a ve své tloušťce je snadné najít nezbytné kolonie buněk. Je důležité, než začnete ředit směs bakterií ve zkumavkách tak, aby koncentrace mikroorganismů nebyla příliš velká.

Bakteriologická metoda vyšetřování, jejíž stadia jsou založeny na izolaci požadované bakteriální kultury, se bez těchto dvou metod nezjišťuje izolované kolonie.

Antibiotikogram

Vizuálně je reakce bakterií na drogy vidět dvěma praktickými způsoby:

1. Metoda papírových disků.

2. Ředění bakterií a antibiotik v kapalném médiu.

Metoda papírového kotouče vyžaduje kultivaci mikroorganismů, které byly pěstovány na pevném živném médiu. Na tomto médiu jsou umístěny různé kruhové papíry, impregnované antibiotiky. Pokud se lék úspěšně vyrovná s neutralizací bakteriální buňky, Po takovém ošetření bude místo bez kolonií. Pokud je reakce na antibiotikum negativní, bakterie přežijí.

V případě použití kapalného živného média se nejprve připraví několik zkumavek s kultivací bakterií různého stupně ředění. Do těchto zkumavek se přidávají antibiotika a během dne pozorují proces interakce látky a mikroorganismů. Nakonec se získá kvalitativní antibiotikum, z něhož lze hodnotit účinnost léčiva pro danou kulturu.

Hlavní úkoly analýzy

Jsou zde uvedeny cíle a fáze bakteriologické metody vyšetřování.

1. Získat zdrojový materiál, který bude použit k izolaci bakteriálních kolonií. Může se jednat o rozmazání z povrchu jakéhokoliv předmětu, sliznice nebo dutiny lidského těla, krevní test.

2. Pěstování kultury na pevném živném médiu. Po 24 až 48 hodinách na petriho misce najdete kolonie baktérií různých druhů. Vybíráme požadovaná morfologická a / nebo biochemická kritéria a provádíme s ní další práci.

3. Reprodukce získané kultury. Bakteriologická metoda výzkumu může být založena na mechanickém nebo biologickém způsobu zvýšení počtu bakteriálních kultur. V prvním případě se provádí práce s pevnými nebo kapalnými živinami, na kterých se bakterie množí v termostatu a tvoří nové kolonie. Biologická metoda vyžaduje přirozené podmínky pro zvýšení počtu bakterií, takže zkušební zvíře je zde infikováno mikroorganismy. O několik dní později se v krevním vzorku nebo na skvrnu objeví řada prokaryot.

4. Práce s vyčištěnou kulturou. K určení systematické polohy bakterií a jejich patřičnosti je nutné provádět důkladnou analýzu buněk podle morfologických a biochemických vlastností. Při vyšetřování patogenních skupin mikroorganismů je důležité vědět, jak účinný je účinek antibiotik.

To byla obecná charakteristika bakteriologické metody vyšetřování.

Vlastnosti analýzy

Hlavním pravidlem provádění bakteriologického výzkumu je maximální sterilita. Pokud probíhají práce s testovacími zkumavky, měly by se kultury a transplantace bakterií provádět pouze s vyhřívaným lihem.

Všechny stupně bakteriologické vyšetřovací metody vyžadují použití speciální smyčky nebo pipety Pasteur. Oba přístroje musí být předem ošetřeny v plameni světelné lampy. Pokud jde o pipetou Pasteur, pak před tepelnou sterilizací je nutné špičku pipety protáhnout pinzetou.

Technika výsevu bakterií má také své vlastní vlastnosti. Za prvé, při setí na pevném médiu provádějte bakteriální smyčku nad povrchem agaru. Samotná smyčka by samozřejmě měla mít na povrchu vzorek mikroorganismů. Také se praktikuje sevření uvnitř kultivačního média, v takovém případě musí smyčka nebo pipeta dosáhnout dna Petriho misky.

Při práci s kapalnými médii se používají trubky. Je důležité, aby se ujistil, že tekutina nebude dotýkat okraje laboratorního skla nebo korkem a používaných nástrojů (kapátkem, závěsů), nedotýkaly cizích předmětů a ploch.

Význam biologické metody výzkumu

Analýza vzorku bakterií má svou praktickou aplikaci. Za prvé, bakteriologická metoda výzkumu může být použita v medicíně. Například je nutné prozkoumat pacientovu mikroflóru za účelem správné diagnostiky a také vypracovat správný průběh léčby. Zde pomáhá antibiotikogram, který bude ukazovat aktivitu léků proti příčinám onemocnění.

Analýza bakterií se v laboratoři používá k určení takových nebezpečných onemocnění, jako je tuberkulóza, recidivující tyfus nebo kapavka. Používá se také ke studiu bakteriálního složení mandlí, dutin orgánů.

Pro stanovení kontaminace životního prostředí lze použít bakteriologickou metodu výzkumu. Podle kvantitativního a kvalitativního složení nátěru z povrchu objektu je stupeň populace tohoto média určen mikroorganismy.