Mikrobiologické metody pro studium vody, půdy, ovzduší

Mikroorganismy jsou nejmenší, většinou jednobuněčné bytosti, které jsou v přírodě rozšířené. Nacházejí se ve všech prostředích (vzduch, půda, voda), u lidí a zvířat, v rostlinách.

Rozmanitost kvality a počet mikroorganismů závisí primárně na nutričních látkách. Důležité jsou však také vlhkost, teplotní režim, provzdušňování, působení slunečních paprsků a další faktory.

Metody hygienicko-mikrobiologického výzkumu přírodní média mohou detekovat přítomnost patogenních mikroorganismů, určit jejich počet a podle získaných výsledků vyvinout opatření k eliminaci nebo prevenci infekčních onemocnění. Navíc kvantitativní účetnictví je nezbytné pro modelování ekosystémů a pro rozvoj principů řízení přírodních procesů. Zvažme další, co se stane metody mikrobiologického výzkumu.

Půda

Vědci ji považují za jeden z možných způsobů přenosu infekčních patologií. Při izolaci nemocných lidí nebo zvířat pronikají do půdy patogenní mikroorganismy. Některé z nich, zejména spor, mohou zůstat v zemi po dlouhou dobu (někdy několik desítek let). V půdě vstupují do patogenů takových nebezpečných infekcí jako je tetanus, antrax, botulismus atd. Metody hygienicko-mikrobiologického studia půdy umožňují stanovit "mikrobiální číslo" (počet mikroorganismů v gramech půdy), jakož i koli-index (počet E. coli).

Analýza půd: obecné informace

Chcete-li metody mikrobiologické studie půdy Za prvé, přímá mikroskopie a osévání na hustém živné médium. Populace mikroorganismů a jejich skupin obývajících půdu se liší svou taxonomickou polohou a ekologickými funkcemi. Ve vědě jsou spojeny pod obecným pojmem "půdní biota". Grunt je stanoviště obrovského množství mikroorganismů. Gram půdy obsahuje od 1 do 10 miliard buněk. V tomto prostředí probíhá rozklad organických látek za účasti různých saprofytických mikroorganismů.

Mikroskopická metoda mikrobiologického výzkumu: etapy

Analýza životního prostředí začíná výběrem vzorků. K tomu použijte předem vyčištěný a naložený alkoholový nůž (můžete použít lopatku). Poté je připraven vzorek. Dalším krokem je počítání buněk na znečištěných skvrnách. Zvažme každou fázi zvlášť.

Odběr vzorků

Při analýze orné půdy se zpravidla odebírají vzorky z hloubky celé vrstvy. Nejprve odstraňte 2-3 cm od vrcholu půdy, protože může obsahovat cizí mikroflóru. Poté jsou monolity odebrány ze studovaného místa půdy. Délka každého z nich by měla odpovídat tloušťce vrstvy, ze které je třeba vzorek odebrat.

Na místě 100-200 metrů čtverečních. m, odebírá se 7-10 vzorků. Hmotnost každého činí asi 0,5 kg. Vzorky by měly být důkladně promíchány v sáčku. Poté odeberte průměrný vzorek o hmotnosti přibližně 1 kg. Měl by být umístěn v pergamenovém (sterilním) sáčku, vloženém do taškového vaku. Před přímou analýzou je vzorek uložen v chladničce.

Příprava na výzkum

Smíšená půda se nalije na suché sklo. Předběžně se musí otřít alkoholem a spálit hořák. Pomocí špachtle je půda důkladně promíchána a rozložena rovnoměrně. Bezpodmínečně je nutné odstranit kořeny, další cizí prvky. Za tímto účelem se používají pinzety. Před prací jsou pinzety a špachtle kalcinovány nad hořákem a chlazeny.

Z malých částí půdy rozložené sklem se odebírají malé části. Oni jsou váží v porcelánovém poháru v technické míře. Povinná fáze mikroskopické metoda mikrobiologického výzkumu je speciální zpracování vzorku. Je nutné předem připravit 2 sterilní baňky. Jejich kapacita by neměla překročit 250 ml. Do jedné baňky se vlije 100 ml vody z vodovodu. Z tohoto roztoku se odebírají 0,4 až 0,8 ml kapaliny a vzorek půdy se promyje do pastovitého stavu. Směs musí být třepána prstem nebo gumovým talířem po dobu 5 minut.

S vodou z první baňky se půdní hmota přenese do prázdné baňky. Poté se znova otírá. Poté se hmotě přenese do baňky v blízkosti plamene hořáku. Nádoba s půdní suspenzí se třikrát protřepe na kolébce. Poté se nechá ustálit asi 30 sekund. To je nezbytné, aby se velké částice usadily. Po půl minutě se hmota používá k přípravě přípravku.

Počítání buněk na pevném nátěru

Přímé mikroskopické studium půdy provádí metoda mikrobiologického výzkumu, vyvinutý Vinogradským. V určitém objemu připravené suspenze se počítá počet buněk mikroorganismů. Studie fixních nátěrů vám umožňuje dlouhou dobu šetřit drogy a provádět výpočty v libovolném vhodném čase.

Příprava léčiva je následující. Určitý objem suspenze (obvykle 0,02-0,05 ml) se nanese na mikrotitrační destičku. K tomuto roztoku se přidá kapka agar-agar (polysacharid agaropektinu směsi a agarosa se extrahuje z hnědé a červené řasy Černého moře), míchá se rychle a chová více než 4-6 čtverečních. viz Roztok se suší na vzduchu a fixuje se 20-30 minut. alkoholu (96%). Následně se přípravek navlhčí destilovanou vodou a umístí se do karbolického roztoku erythrosinu po dobu 20 až 30 minut.

Po zafarbení se promyje a usuší na vzduchu. Buňky jsou počítány s cílem ponoření.

Secí na husté médium

Mikroskopické metody mikrobiologického výzkumu může detekovat velké množství mikroorganismů. Ale přesto tento způsob sečení je považováno za nejčastější praxi. Její podstatou je vysetí objemu přípravku (suspenze půdy) do Petriho misky na hustém médiu.

Toto metoda mikrobiologického výzkumu nám umožňuje vzít v úvahu nejen množství, ale také složení skupiny a v některých případech druhové složení mikroskopické flóry. Počítání počtu kolonií se provádí zpravidla ze dna Petriho misky v přeneseném světle. Na počítané sekci je tečka umístěna značkou nebo inkoust.

Analýza vody

Mikroflóra vodního útvaru zpravidla odráží mikrobiální složení půdy kolem ní. V tomto ohledu, metody hygienického a mikrobiologického studia vody a půdy mít zvláštní praktickou hodnotu při studiu stavu určitého ekosystému. Čerstvé rybníky obsahují zpravidla koky, tyčinkovité bakterie.

Anaeroby ve vodě se nacházejí v malých množstvích. Pravidelně se množí na dně nádrží, v bahno, účastní se procesů čištění. Mikroflóra oceánů a moří je zastoupena především halofilními bakteriemi, které milují sůl.

Ve vodě ve skutečnosti neexistují žádné artézské studny mikroorganismů. To je způsobeno filtrační schopností půdní vrstvy.

Společné metody mikrobiologického výzkumu vody je zváženo stanovení mikrobiálního čísla a kolitidy nebo kolizního indexu. První indikátor charakterizuje počet bakterií v 1 ml kapaliny. Koli-index je počet E. coli přítomný v litre vody a titr kolitu je minimální množství nebo maximální ředění kapaliny, ve které je ještě možné detekovat.

Stanovení mikrobiálního čísla

Tato metoda sanitárního mikrobiologického výzkumu vody je následující. V 1 ml vody se stanoví počet mezofilních a fakultativně anaerobní (mezilehlých) aerobní schopen na maso peptonem agaru (primární médium) při teplotě 37 ° C. během dne vytvářet kolonie, viditelné s nárůstem 2-5 r. nebo pouhým okem.

Klíčová fáze metoda mikrobiologického výzkumu vody seje. Ze všech vzorků se vysévají alespoň 2 různé objemy. Při analýze vody z vodovodu se ke každé misce přidá 1-0,1 ml čisté kapaliny a 0,01 až 0,001 ml kontaminované kapaliny. Pro naočkování 0,1 ml nebo méně se kapalina zředí destilovanou (sterilní) vodou. Důsledně připravte desetinásobné ředění. 1 ml každého z nich se přidá ke dvěma Petriho miskám.

Ředění se naplní živným agarem. Musí být předem roztavena a ochlazena na 45 °. Po aktivním míchání se médium ponechá na vodorovném povrchu k ztuhnutí. Při 37 stupních. plodiny se pěstují po celý den. The metoda mikrobiologického výzkumu vody umožňuje vzít v úvahu výsledky u těch šálků, kde je počet kolonií v rozmezí od 30 do 300.

Vzduch

Je považován za tranzitní médium pro mikroorganismy. Hlavní metody mikrobiologického výzkumu ovzduší sedimentace (sedimentace) a aspirace.

Mikroflóra ovzduší je podmíněně rozdělena na proměnnou a konstantu. Prvním z nich jsou kvasnice, koky tvořící pigmenty, sporící bacily, tyčinky a další mikroorganismy, odolné vůči sušení, vystavení světlu. Zástupci proměnlivé mikroflóry, pronikající do vzduchu z obyčejného prostředí pro ně, netrvají dlouho svou životaschopností.

Ve vzduchu velkých megaci jsou mikroorganismy mnohem víc než ve venkovním prostředí. Nad mořem jsou lesy bakterií velmi málo. Odstranění vzduchu usnadňuje srážky: sníh a dešť. V uzavřených prostorách mikrobů mnohem více než v otevřených prostorech. Jejich výše se zvyšuje v zimním období při absenci pravidelného vysílání.

Sedimentace

Toto metoda mikrobiologického výzkumu v mikrobiologii je považován za nejjednodušší. Je založen na usazování kapiček a částic na povrchu agaru v otevřené Petriho misce pod vlivem gravitace. Sedimentační metoda neurčuje přesně počet bakterií ve vzduchu. Faktem je, že na otevřeném poháru zachytit malé frakce prachových částic a bakteriálních kapek je poměrně obtížné. Na povrchu jsou zachovány převážně velké částice.

Tato metoda se nepoužívá při analýze atmosférického vzduchu. Toto prostředí je charakterizováno velkými výkyvy rychlosti proudění vzduchu. Sedimentace však může být použita při absenci sofistikovanějších nástrojů nebo zdroje elektrické energie.

Stanovení mikrobiálního čísla se provádí metodou Omelyansky. V souladu s tím, po dobu 5 minut na povrchu agaru o ploše 100 metrů čtverečních. cm vyrovnává počet bakterií, které se vyskytují v 10 litrech vzduchu.

Objednávka 535 "O sjednocení mikrobiologických metod výzkumu"

Bakteriologická analýza zaujímá důležité místo v komplexních klinických a laboratorních činností zaměřených na diagnostiku, prevenci a léčbě různých infekčních chorob. Nejsou však omezeny na výzkum v oblasti životního prostředí.

Zvláštní význam má bakteriologická analýza biologického materiálu v lékařských zařízeních. Na výzkumy strávené v lékařských zařízeních jsou kladeny zvýšené požadavky. Účelem nařízení "o sjednocení mikrobiologických metod výzkumu" je zlepšení bakteriologické analýzy, zlepšení kvality a účinnosti mikrobiologické diagnostiky.

Mikroskopické vyšetření skvrny pro ženy

Je to klíčová metoda analýzy v diagnostice pohlavně přenosných infekcí a oportunních onemocnění (způsobených oportunními bakteriemi).

Mikroskopická analýza umožňuje posoudit kvalitativní a kvantitativní složení mikroflóry, ověřit správnost odběru vzorků. Například přítomnost vaginálního epitelu v nánosu z cervikálního kanálu indikuje porušení pravidel výběru biologický test.

Stojí za to říci, že mikrobiologické vyšetření v tomto případě je obecně doprovázeno určitými problémy. Jsou souvisí s tím, že v dolní genitálního traktu se běžně vyskytuje pestrou mikroflóru, která se mění v různém věku. Ke zlepšení účinnosti studie byly vytvořeny jednotné pravidla.

Diagnostika virových infekcí

Provádí se metodami detekce RNA a DNA patogenů. Jsou založeny především na stanovení nukleotidových sekvencí v patologickém materiálu. Pro tento účel se používají molekulární sondy. Jsou to uměle vytvořené nukleové kyseliny doplňkové k virovým kyselinám označeným radioaktivní značkou nebo biotinem.

Zvláštností tohoto způsobu je vícenásobné kopírování specifického fragmentu DNA, který zahrnuje několik set (nebo desítek) nukleotidových párů. Mechanismem replikace (kopírování) je to, že dokončení může začít jen v určitých blocích. Pro jejich vytvoření se používají primery (primery). Jsou to syntetizované oligonukleotidy.

Diagnostika PCR (polymerázová řetězová reakce) se snadno provádí. Tato metoda umožňuje rychle získat výsledek pomocí malého množství patologického materiálu. Pomocí diagnostiky PCR se detekují akutní, chronické a latentní (skryté) infekce.

S citlivostí je tato metoda považována za vhodnější. V současné době však testovací systémy nejsou dostatečně spolehlivé, takže diagnostika PCR nemůže zcela nahradit tradiční metody.