Metody stanovení srážecí reakce

Tento článek bude věnován fenoménu srážecí reakce. Zde se zabýváme rysy výpovědi tohoto jevu, fenoménem difúze, obecnou charakteristikou, rolí v lidském životě a mnohem více.

Poznání tohoto fenoménu

Srážení je fenomén sérologického typu, během kterého rozpustné antigeny interagují s protilátkami a v důsledku toho dochází k vysrážení sraženiny - sraženiny.
Obecná charakteristika srážecí reakce je formou konzistentního účinku antigenu a protilátky. Tyto typy interakcí umožňují stanovit přítomnost neznámých antigenů v testované látce přidáním známých protilátek a antigenů. Proces srážení bez přítomnosti solí bude horší a optimální optimum leží v rozmezí pH 7,0-7,4.

Kompozitní prvky reakce

Mezi složky srážecí reakce se rozlišují tři hlavní prvky:

1. Antigen mající molekulární povahu. Je ve stavu jemně rozptýleného typu, jinými slovy je rozpustný. A také volal pretsipitogenom takový antigen, což je tkáň lyzátu nebo extrakt a jiné. Pretsipitogen má charakteristický rozdíl od aglutinogenem, která leží ve velikosti částic, které ji tvoří. Aglutinogen má vlastní buněčnou velikost a sraženiny jsou úměrné velikosti molekuly. Roztok antigenu je charakterizován průhledností.
2. Protilátka lokalizovaná v séru lidské krve, stejně jako v imunologickém diagnostickém séru, které obsahuje studované protilátky.
3. Elektrolyty jsou roztok chloridu sodného, ​​který je izotonický.

Příprava precipitogenu

Formulace srážecí reakce je nemožné bez precipitogenu, který se získává mletím a extrakcí antigenů z proteinu. Extrakce probíhá vroucím nebo jiným způsobem.
Ukázkovým příkladem jsou pretsipitogenov lyzáty, a tkáňové a orgánové výtažky, sérum, různé typy filtrátů na základě vývar kulturách mikrobů, stejně jako solný extrakt mikroorganismů a autolizatnye látky.

Staging v srážení

Nyní zvážíme metodu stanovení srážecí reakce.
Proběhla reakce s vyzráženým kruhem, která probíhá ve speciálně připravených zkumavkách. V dutině nádobí přidejte sérum a nasypte ho stěnou pipetou. Dále zhora přesně vytvoří vrstvení příslušného množství precipitogenu a potom se trubka přivede do svislé polohy od horizontální polohy. Formulace a zaznamenávání srážecí reakce jsou velmi přísné operace. Výsledek je zaznamenán po vzniku bílého kruhu na hranici mezi antigenem a protilátkou. Pokud reagující prvky reakce vzájemně odpovídají, jsou vázány, ale toto se stává patrné po dlouhé době jejich vzájemného působení.
Srážková reakce se také provádí v Petriho misce nebo na šoupátku, kde se přenáší agarový gel, přičemž se nanese malá vrstva. Po ztuhnutí se do gelu odřízne malý počet jamek, do kterých budou umístěny antigeny a protilátky. Existují dva způsoby: metoda radiální imunodifuze a dvojitá imunodifuzace.

Obecné informace

Mechanika práce srážení je podobná zařízení aglutinace. Pod vlivem imunního séra antigen, který již vstoupil do reakce, snižuje jeho stupeň disperze. Důležitou podmínkou je průhlednost jak séra, tak antigenu.
Zlepšit registraci reakce může být, pokud vrstvení antigeny na protilátky. V důsledku toho může být pozorován vzhled precipitátů ve formě kruhu. Tento jev se nazývá srážková prstence a provádí se ve speciálních zkumavkách o průměru 2,5 až 3,5 mm. Jedním z nejrozšířenějších příkladů srážecí reakce je diagnóza antraxu.
Srážení umožňuje stanovit stupeň toxigenicity kultury záškrtu v agaru.
V průběhu zkoumané reakce dochází k vysrážení antigenních komplexů a protilátek. Srážení je imunologický jev, který umožňuje stanovit obsah protilátek v séru pacienta nebo očkované osoby a zvířat.

Účinek titrace

Je důležité vědět, že údaje získané titrací výše uvedené metody nemají kvantitativní vyjádření. K vytvoření a analýze kvantitativního vyhodnocení obsaženého počtu protilátek vyvinuli M. Heidelberger a E. Kabat speciální reakční techniku ​​založenou na hledání a identifikaci ekvivalentní zóny. Míchání věku souvisejícího počtu antigenů s konstantním množstvím antiséra vede ke zvýšení počáteční sraženiny a pak opět klesá kvůli zvýšení schopnosti rozpouštět antigenní komplexy. Po stanovení množství protilátek v supernatantu obsažených v každé zkumavce lze zjistit, že u určitého počtu misků s protilátkami nebude kapalina chybějící. Zde se vytvoří největší sraženina ve srovnání s jinými zkumavkami. Díky tomuto a odečtení antigenní proteinové sraženiny z celkových hodnot proteinu je možné získat přesnou hodnotu obsažených protilátek v objemu specificky studovaného séra. Dále se množství bílkovinných molekul sraženiny stanoví množstvím dusíku nebo pomocí kolorimetrických metod.

Ocenění hodnot

Vyhodnocení hodnot srážky v diagnostické metodiky je třeba brát v úvahu pravděpodobnost přítomnosti imunitního séra protilátkou, která nevykazuje vlastnost precipitační, což znamená, že nemůže vytvoření sraženiny po odpovědi na antigeny. Seznam takových molekul zahrnuje neúplné protilátky a některé druhy z gama-A-globulínové skupiny.

Srážková reakce za laboratorních podmínek zjišťuje její použití v řadě modifikací. Například termoprecipitační reakce se používá k detekci bakteriálních botulinových antigenů, antraxu atd., Které nejsou podrobeny tepelné denaturaci. Na rozdíl od srážení kroužků používá podobný typ reakce filtráty uvažovaného materiálu ve vroucím stavu.
Analýza precipitační reakce v komplexní směsi neumožňuje charakterizovat vlastnosti jednotlivých složek směsi. V takových případech se člověk uchýlí k metodě srážek v agaru a také používá imunoelektroforézu.

Srážení difuzní povahy

V této oblasti výzkumu existuje koncepce reakce difúzního srážení (RAP). Je založen na schopnosti difundovat gelové protilátky a rozpustné antigeny. Difúze je schopnost molekuly určité látky proniknout do molekul jiného, ​​což je způsobeno tepelným pohybem.
Gel je systém disperzního typu, ve kterém je kapalná fáze rovnoměrně rozdělena v pevné fázi. Nejčastěji pro tuto reakci se používá agarový gel.
Po zadání parametrů, ve kterých mohou molekuly vzájemně difundovat, bude jejich setkání doprovázeno tvorbou komplexu antigen + protilátka. Takový neoplasmus může difundovat, protože je v samotném gelu a bude se vysrážet, a to ve formě pásku, který může být detekován bez očí. V případě homologie antigenu a protilátky se pás nevytvoří.
Vytvoření podmínek, ve kterých bude difúze probíhat ve vrstvě agaru, bude zahrnovat plnění komponent, ale celkový počet otvorů a jejich relativní umístění je určen typem problému, který je třeba vyřešit. RAP umožňuje osobě detekovat a identifikovat neznámé izolované viry pomocí studie s použitím známého séra z protilátek.

Aplikace

Srážky se často používají nejen při diagnostice onemocnění, ale také se uplatní ve forenzní lékařské prohlídce. Je obtížné si představit analýzu, v níž je možné určit druhu patřící k krvi, část orgánu nebo tkáně nalezené na zločinecké zbrani, v níž se nepoužívá srážecí reakce. Během tohoto procesu se používají srážená séra, která se získá imunizací různých zvířat a ptáků. Je důležité, aby hladina titru v séru nebyla menší než 1: 10 000 a také musí mít dostatečnou specificitu. Z detekované skvrny krve nebo jejích kostek uděláte kapuci pro fiz. Řešení, které bude později postiženo srážecím sérem. Podle této reakce je možné stanovit typy tkání a orgánových proteinů lidí i zvířat. Získání zakalených výtažků činí nutností uchýlit se k agaru.

Závěry

Analýza pro čtení informace, je možné učinit závěr, že se srážecí reakce jsou nesmírně důležité pro člověka, protože umožňují diagnostikovat různých antigenů pomocí protilátek, jak je tento jev je široce používán v forenzní a umožňuje identifikaci typu krve, tkáně nebo orgánu v souvislosti s konkrétním subjektu. Existuje několik typů a způsobů srážek, které se používají v souladu s nově vznikajícími potřebami vyřešeného problému.