Tinktorové vlastnosti jsou co?

Před studiem mikroorganismů pod mikroskopem se studovaný vzorek podrobí speciální přípravě. V přirozené formě jsou téměř všechny bakterie průhledné, takže jsou barveny barvivy. Barvení nám umožňuje zjistit jak morfologické vlastnosti vyšetřovaných mikroorganizmů, tak i jejich zařazení do jednoho nebo druhého druhu. Schopnost mikroorganismů vnímat barviva se nazývá tinctorial vlastnosti. S jejich pomocí biologové určují typ mikroby, jeho parametry, vlastnosti struktur a také identifikují patogeny infekčních onemocnění. Z tohoto článku se dozvíte podrobněji, že jde o tinctorial vlastnosti a také o tom, jak jsou používány ve vědě.

Úlohy, které způsob barvení řeší

Nejprve zjistíme, jaký je význam tinktoriálních vlastností mikroorganismů. Barvení vzorku je jednou z klíčových technik mikrobiologie, umožňující studovat jak vnější, tak vnitřní strukturu organismů. Bakterie jsou průsvitné mikroorganismy, které refraktují světelné paprsky. Proto se v běžném mikroskopu nemohou uvažovat. Různé části bakterií interagují odlišně s barvivem. Tinktorální vlastnosti jsou vynikající příležitostí pro výzkumníky. Jsou odlišné v různých mikroorganismech, které nám umožňují určit jejich nejdůležitější vlastnosti: tvar, velikost, strukturu, umístění a podobně.

Příprava vzorku a jeho barvení

Bez ohledu na to, jaká barvicí technika pracuje badatel, se tento postup skládá z několika povinných kroků:

1. Příprava vzorku. V kapce vody umístěné na skluzu se studovaný materiál zavede pomocí bakteriologické smyčky.
2. Vysušení nátěru. Provádí se při pokojové teplotě nebo v proudu teplého vzduchu (ale není příliš blízko zdroji tepla).
3. Fixace. Předpokládá fixaci mikroorganismů na skle, aby se zvýšila jejich náchylnost k barvení.
4. Barvení. Barva se aplikuje na zkušební vzorek a nechá se chvíli stát. Poté se zbytky barviva odstraní a vzorek se promyje vodou.
5. Sušení. Konečná fáze, která vám umožní zbavit se zbytků vody po opláchnutí. Po vysušení je vzorek připraven k vyšetření pod mikroskopem.

Barevné barvy

Barvení vzorků se provádí pomocí anilinových barviv s jiným indexem kyselosti (pH). Jsou rozděleny na: základní (zdůraznění druhého písmene o), kyselé a neutrální.

V základních barvách činným činidlem je kation. Pomocí různých činidel je možné získat různé barvy barvení mikrobů:

1. Red - pyronin, safranin, neutrální a purpurový základní.
2. Violet - thionin, methyl, hořčice a krystalová fialová.
3. Modrá je methylenová modř a Victoria.
4. Zelená - malachit a methylenová zelenina.
5. Černá je indulin.
6. Hnědý je vesuvin a chrysoid.

V kyselých barvách na barvicí vlastnosti je připojen anion. Z nich jsou nejčastější:

1. Red - kyselý fuchsin a eosin.
2. Černá je nigrosin.
3. Žlutá je kyselina pikronová.

Neutrální barviva mohou zachycovat jak anionty, tak i kationty. Jako pozoruhodný příklad těchto může být nazýván rhodamin V.

Stávající metody barvení, založené na vybarvovací vlastnosti mikroorganismů, mohou být rozděleny do tří hlavních typů: vitální, postvitalny a barvení spor. V každém z těchto metod podrobněji.

Životní cesta

Tato metoda se také nazývá intravitální, a proto je barvení prováděno pro mikroskopování živých organismů. Zavedení barvícího léčiva umožňuje studovat vlastnosti intracelulárních struktur a tkání. Existují také metody vitálního barvení, což naznačuje zabití vzorku ihned po zafarbení.

Pro intravitální barvení se používají speciální barviva, která jsou charakterizována nízkou toxicitou a vysokou pronikavou silou. Vedle životně důležitých přípravků se k řešení tohoto problému také používají fluorochromy nebo fluorescenční barviva.

Posturální cesta

Na rozdíl od předchozí verze se zde barvení provádí po usmrcování mikroorganismů. Metody postbarvení jsou rozděleny na jednoduché a složité. Jednoduché mohou stanovit morfologické vlastnosti studovaných organismů: tvar, velikost, umístění, umístění. Komplexní metody jsou úzce zaměřené a umožňují získat informace o struktuře mikroorganismu. Nejčastěji složité metody barvení nesou jména svých tvůrců. Z nich jsou nejoblíbenější následující metody.

Gramova metoda. Metoda vyvinutá na konci 19. století, je založen na diferenciaci mikrobů na propustnost buněčných stěn. Použití barviva zpracování vzorků anilin (hořec fialové nebo methyl), a následné praní výzkumný pracovník obdrží dva typy mikrobů: Gram-pozitivní (modrá barva charakteristické) a Gram (zajištěné). S cílem získat úplnější obraz, také používal červené barvivo, které po zpracování i negativní mikroorganismy získat barvu - od růžové až červené.

Gramova metoda dovoluje klasifikovat mikroby a provádět jejich separaci podle tinkturálních vlastností. Jedná se o jeden z nejjednodušších a nejběžnějších metod přípravy vzorku pro mikroskopii. Aplikovanou hodnotou této techniky je diagnostikovat různé infekční nemoci.

Metoda Tsile-Nielsen. Tato metoda byla také vyvinuta na konci 19. století. Je založen na stanovení kyselé odolnosti bakterií barvením. Touto metodou je možné vzhledem k tinkturálním vlastnostem mikroorganismů identifikovat patogeny tuberkulózy, malomocenství a mykobakteriózy.

Metoda Romanovsky-Giemsa. Tato metoda byla vyvinuta na počátku dvacátého století. Jeho podstata spočívá v tom, že po barvení vzorek speciální barvivo acidophilus získat různé odstíny červené a bazofilní - z fialové na modrou.

Acidophiles volají mléko a bakterií kyseliny octové, jejichž životnost vyžaduje nízkou kyselost média. Basofily jsou mikroby, které mohou být barveny základními barvivy. Způsob je tedy založen na separaci mikrobů od hodnoty kyselosti média. Je široce používán při studiu morfologie prvoků a spirochetů.

Metoda Burry-Hins. Umožňuje stanovit přítomnost bakterií v kapslích.

Morozovova metoda. Tato metoda barvení umožňuje viditelnost bakterií bakterií. K tomu je třeba provést takové manipulace:

1. Vzorek odeberte kyselinou, aby se mohly uvolnit.
2. Opravte uvolněnou látku tanínem.
3. Vzorek zbarvíte s dusičnanem stříbrným.

Výsledkem je, že se bakterie se všemi jejími flagelkami stává viditelným. Jeho barva se může pohybovat od žluté až hnědé.

Zbarvení sporů

Tinktoriální vlastnosti mikroorganismů umožňují pomocí barviv učinit jejich spory znatelné. K tomu je nejčastěji používána metoda Tsilya-Nilson. Jeho podstatou je zpracování zkušebního vzorku s fuchsinem Tsil a jeho další změna barvy pomocí 1% kyseliny sírové. V důsledku toho jsou spóry zbarvené růžově a dobře vystupují na pozadí modrých bakterií.

Abychom získali viditelný obraz o sporu, dovoluje to i technika Orzeszko. Podle této metody jsou spárové skořápky nejprve vyleptány při vysoké teplotě kyselinou a potom se použije zbarvení Ziehl-Nilson.

Strukturální vlastnosti mikrobů

Buňka mikroorganismu se obvykle skládá ze stěn (Shell), cytoplazmatické membráně, v cytoplazmě, které obsahují ve svém složení a včetně nukleotidů. Některé druhy bakterií také mají bičíky, fimbrií nebo řasinky, a mohou tvořit kapsli nebo spory.

Skořápka mikroorganismu určuje svůj tvar a chrání jej před nepříznivými okolními podmínkami a osmotickým vnitřním tlakem. Stěny mikroorganizmů mají poměrně složité chemické složení a strukturu. V grampozitivních a gramnegativních buňkách se liší. První z nich mají tlustou buněčnou stěnu obsahující kyselinu teikovou a několik lipidů. Stěna druhé se skládá z jejich polypeptidových a polysacharidových vrstev.

Venku je buněčná stěna pokrytá vrstvou sliznice. U některých mikroorganizmů může vzrůst (bobtnat) tvořit kapsli, skládající se převážně z polysacharidů a někdy polypeptidů. Neodpovídá na barvení. To je důvod, proč se tyto mikrobi zkoumají metodou Burri-Hins. U některých patogenů (například pneumokoků) se kapsle tvoří pouze v organismech zvířat nebo lidí.

Ve studii mikrobů pod mikroskopem pozornost je také věnována barvení cytoplazmy a jejích struktur. Cytoplasma může být homogenně (homogenně) nebo heterogenní (inkluze organické nebo anorganické povahy jsou přítomny). Pro studium inkluzí používejte speciální metody barvení (například podle Neissera). Navíc přítomnost jádra nebo nukleotidu je stanovena v cytoplazmě.

Poté, co jsme se dozvěděli, že jde o tinctorial vlastnosti a jak pomáhají v mikroskopii, budeme zvažovat vlastnosti některých běžných mikrobů.

Streptokoky

Z pohledu tinkturálních vlastností jsou streptokoky grampozitivní mikroorganismy, takže jsou určovány Gramovou metodou. Nejsvětlejší barva těchto bakterií nastává při vystavení modré lafferovně. Struktura jejich buněk se podobá řetězci.

Salmonella

Jedná se o facultativní anaeroby, z nichž většina je mobilní kvůli přítomnosti flagely. Na hustém živném médiu se salmonely shromažďují do kulatých bíložlutých kolonií. Spory se netvoří, mají peritrichy a mikrokapsle. Stejně jako streptokoky jsou salmonely barveny gramovou metodou. Rozdíl spočívá ve skutečnosti, že tinkturální vlastnosti salmonel jsou gramnegativní.

Meningokoky

Mají zaoblenou polymorfní formu. Na živné médium jsou umístěny ve dvojicích. Tinktorové vlastnosti meningokoků jsou takové, že jsou gramnegativní, ale nereagují zřetelně na Gramově barvení. Nerovnoměrné zbarvení je způsobeno skutečností, že čím je buňka starší, tím slabší její tinkturální vlastnosti. Flakum nemá meningokoky, ale netvoří spor.

Cholera Vibrio

Tento mikrob má jeden polární flagelum, který je vybaven pláštěm a zvlněnou membránou. Cholera vibrio má výraznou mobilitu. Je charakterizován polymorfismem. Tinktorové vlastnosti cholery vibrio způsobují jeho barvení anilinovými barvivy. Obvykle se jedná o vodu fuchsin Pfeifer nebo carbolic fuchsin Shlya.

E. coli

Je to volitelný anaerob, který nevytváří spor. Buňky jsou ve formě tyčí se zaoblenými konci. Tinkerové vlastnosti Escherichia coli ji přenášejí gramnegativních bakterií. Kmeny bakterií s peri-trichálně lokalizovanou vlajkou se mohou pohybovat.

Neutrofily

Tento název byl dán mikrobům kvůli jejich tinctorial vlastnosti. Neutrofily mohou být intenzivně zbarveny podle Romanovského způsobu, jak základních barviv, tak kyselých eosinů. Bakterie dospělých mají segmentované jádro, což znamená, že patří k polymorfonukleárním buňkám. Jsou obdařeny přilnavostí, pohyblivostí a také schopností chemotaxe a zachycování částic. Spolu s bazofily a eosinofily patří do granulocytů.

Bazofily

Analogicky s předchozími mikroby získaly tyto bakterie své jméno kvůli tinktorovým vlastnostem. Basofily jsou intenzivně obarveny hlavním barvivem a nejsou úplně barveny kyselým eosinem. Mají velké granulocyty a obsahují hodně: histamin, serotonin, prostaglandiny, leukotrieny a další mediátory zánětlivých a alergických procesů.

Eosinofily

Na rozdíl od dvou předchozích granulocytů jsou tyto mikroby intenzivně barveny pouze kyselým barvivem a nejsou barveny hlavními přípravky. Eosinofily jsou obdařeny schopností extravazace, chemotaxe a pohybu amoeboidu. Mohou absorbovat a vázat řadu mediátorů zánětlivých a alergických reakcí.