PCR analýza: co je to? Jak správně provést test PCR

Ne tak dávno se vyvinula spolehlivá, vysoce citlivá a rychlá metoda diagnostiky různých lidských infekčních chorob. Tato metoda se nazývá "PCR analýza". Co je to, v čem

Historie objevu

Vymyslel metodu polymerázové řetězové reakce (PCR) americký vědec Cary Mullis v roce 1983. Původně patentovaný diagnostickou metodou společnost "Cetus Corporation", ve které jeho tvůrce pracoval. V roce 1992 však byla všechna práva a patenty prodána společnosti "Hoffman-La Roche". Poté se zdálo, že byly provedeny paralelně podobné studie a byly zaznamenány i dalšími americkými biology, jako jsou Alice Chenová, David Edgar, John Treel. V roce 1980, sovětští vědci A. Slyusarenko, A. Kaledin a S. Gorodetsky. Proto nebylo možné určit jediného nositele práv. Mnoho vynikajících biochemiků přispělo k vývoji metody polymerázové řetězové reakce a patentovalo jejich inovace. V současné době se analýza PCR provádí všude ve speciálně vybavených laboratořích.

Podstata diagnostické metody PCR

PCR analýza: co to je a jak to funguje? Podstatou metody je zvýšení specifického mikrobiálního média pomocí speciálního enzymu DNA polymerázy za umělých podmínek. K tomu vynásobte stávající materiál DNA. To znamená, že přítomnost patogenu ve vzorku množství se zvýší na úkor biochemické laboratoři manipulace, a bakterie nebude obtížné zjistit v mikroskopu.

Jak probíhá materiálový výzkum?

Analýza vyžaduje:

• Matrice DNA;
• primery spojující konce části materiálu;
• termicky stabilní enzym DNA polymerázy;
• chemické látky, které zajišťují řádné fungování enzymů;
• roztok pufru nutný k vytvoření vhodných podmínek pro růst a vývoj DNA materiálu.

  

K provedení PCR se provádí 25-30 opakování, sestávající ze tří fází: denaturace, žíhání a prodloužení.

Pro analýzu polymerázové řetězové reakce se používá speciální zařízení - zesilovač. Moderní zařízení umožňuje nastavit potřebný program pro vytápění a chlazení trubek, aby se při diagnostice odstranily chyby.

Kde se používá diagnóza?

Metoda polymerázové řetězové reakce se používá v různých oblastech medicíny:

• Forenzní vědci ji používají k identifikaci genetického materiálu, jako jsou vlasy, sliny nebo krev;
• PCR analýza krve pomáhá s genotypizací, například za účelem detekce individuální geneticky modifikované reakce na určitou drogu;
• pomocí takové metody zjistí existence rodinných vazeb mezi lidmi;
• nejpopulárnější metoda PCR se stala v lékařské diagnostice pro definici různých infekčních onemocnění.

Jaké infekce odhalují PCR?

Takže medicína dlouho a úspěšně použila analýzu PCR. Co je to, už jsme se naučili. A co patogeny mohou být detekovány s tím? Metoda PCR diagnostikuje následující infekčních nemocí:

• hepatitida A, B, C;
• ureaplasmóza;
• Kandidóza;
• chlamydia;
• mykoplazmóza;
• gardnerellez;
• infekční mononukleóza;
• trichomoniáza;
• infekce papilomaviru;
• tuberkulóza;
• herpes infekce 1. a 2. typu;
• Helicobacteriosis;
• cytomegalovirus;
• záškrtu;
• salmonelóza;
• HIV infekce.

  

Také metody PCR se používají při diagnostice rakoviny.

Výhody

Diagnostická PCR má několik výhod:

1. Vysoká citlivost. Dokonce i s několika málo molekulami DNA mikroorganismu analýza PCR určuje přítomnost infekce. Metoda pomůže při chronických a latentních onemocněních. Často v takových případech je mikroorganismus nekultivován jinými způsoby.
2. Pro studium je vhodný jakýkoliv materiál, jako je slina, krev, pohlaví, vlasy, epiteliální buňky. Nejběžnější je krevní test a urogenitální nálek ​​na PCR.

   

3. Nepotřebuje dlouhodobé pěstování plodin. Automatizovaný diagnostický proces vám umožní získat výsledky studie po 4-5 hodinách.
4. Metoda je téměř 100% spolehlivá. Byly zaznamenány pouze jednotlivé případy falešně negativních výsledků.
5. Schopnost identifikovat několik typů patogenů z jediného vzorku materiálu. To nejen urychlí proces diagnostiky onemocnění, ale také významně snižuje náklady na materiál. Lékař často předepisuje komplexní analýzu PCR. Cena vyšetření sestávající z definice šesti patogenů činí asi 1500 rublů.

Doporučení pro přípravu analýzy

Aby výsledky byly spolehlivé ve studii PCR, analýza by měla být provedena na základě doporučení pro přípravnou diagnózu:

1. Před oddáním slin byste měli před podáním materiálu upustit od jídla a léků 4 hodiny. Okamžitě před zahájením procedury opláchněte ústa vařenou vodou.
2. Výše uvedená pravidla by měla být dodržována při odběru vzorku z vnitřního povrchu tváře. Po opláchnutí se doporučuje provést masáž lehké kůže, aby se izolovala sekrece žlázy.
3. Moče se obvykle sklízí doma. Chcete-li to provést, musíte provést důkladné toalety genitálií. V sterilním plastovém obalu je nutné zachytit 50-60 ml moči. Aby byla zajištěna čistota materiálu, doporučuje se, aby ženy vložily do vagíny tampón a muži maximálně vytáhli pokožku. Materiál nemůžete převzít během menstruace.
4. Pro dodávání spermií se musíte 3 dny před podáním materiálu zdržet sexuálního styku. Lékaři také doporučují, aby odmítli navštívit saunu a užívali horkou lázeň, pití alkoholu a kořeněného jídla. 3 hodiny před testem se musíte zdržet močení.
5. Předat urogenitální ostrost obrazu, například v případě, že analýza na chlamydie PCR, žen i mužů je doporučeno, že sexuální odpočinek po dobu 3 dnů. 2 týdny před testem by neměly být užívány antibakteriální léky. Po dobu jednoho týdne musíte přestat používat intimní gely, masti, vaginální čípky a syringing. 3 hodiny před testem se musíte zdržet močení. Během menstruace se sběr materiálu nevykonává, až po uplynutí 3 dnů po ukončení vypouštění krve může dojít k urogenitální skvrně.

PCR během těhotenství

V období očekávání dítěte je mnoho infekčních onemocnění, sexuálně přenosných, extrémně nebezpečných pro normální vývoj plodu. STD mohou vyvolat intrauterinní retardaci růstu, potrat nebo předčasné porodu, vrozené malformace dítěte. Proto je nesmírně důležité předat předčasný PCR test. Při registraci je nutné předložit analýzu - až 12 týdnů.

Plot materiál pochází z děložního hrdla s speciálními štětci. Postup je bezbolestný a nepředstavuje pro dítě žádné nebezpečí. Normálně během těhotenství analyzován pro metodu PCR Chlamydia, stejně jako ureaplasmosis, mykoplazmózy, cytomegaloviru, herpes, papilloma viru. Takový soubor vyšetření se nazývá PCR-6.

PCR pro diagnózu HIV

Vzhledem k tomu, že metoda polymerázové řetězové reakce je velmi citlivá na změny v těle a na podmínky diagnózy, mnoho faktorů může ovlivnit výsledek. Proto analýza PCR pro infekci HIV není spolehlivou metodou, její účinnost je 96-98%. Ve zbývajících 2 až 4% případů má test falešně pozitivní výsledky.

V některých situacích se však nelze HIV vyhnout bez diagnostiky PCR. Obvykle se podává osobám s falešně negativním výsledkem ELISA. Takové ukazatele naznačují, že osoba dosud nevyvinula protilátky proti viru a nemohou být detekovány bez násobného zvýšení počtu. Toho lze dosáhnout provedením krevní testy metodou PCR.

Také tato diagnóza je nezbytná pro děti prvního roku života, které se narodily z HIV-pozitivní matky. Metoda je jediný způsob, jak spolehlivě určit stav dítěte.

PCR pro diagnózu hepatitidy

Polymerázová řetězová reakce způsob umožňuje detekci DNA viru hepatitidy A, B, C, předtím, než k tvorbě protilátek proti infekci nebo nástupu příznaků. Zvláště efektivní je PCR analýza na hepatitidu C, od 85% této choroby je asymptomatická a bez včasného ošetření stává chronickou.

Včasná detekce patogenu pomůže vyhnout se komplikacím a dlouhodobému léčení.

Komplexní průzkum PCR

Komplexní analýza PCR: co je to? To je vyšetření polimezarnoy řetězová reakce Metoda, která zahrnuje simultánní stanovení několik typů infekcí: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, Trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealichyum, herpes 1. a 2. typu, kapavky, papilomavirus. Cena takové diagnostiky se pohybuje od 2000 do 3500 rublů. v závislosti na klinice, použitých materiálech a vybavení a také na typu analýzy: kvalitativní nebo kvantitativní. Co je ve vašem případě nezbytné - rozhodne se lékař. V některých případech stačí pouze stanovit přítomnost patogenu, v jiných, například u infekce HIV, hraje významnou roli kvantitativní titr. Při diagnostice všech výše uvedených patogenů se test nazývá "analýza PCR-12".

Vysvětlení výsledků analýzy

Dekódování analýzy PCR není obtížné. Existují pouze 2 stupnice indikátoru - "pozitivní výsledek" a "negativní výsledek". Pokud je patogen zjištěn, mohou lékaři potvrdit přítomnost onemocnění s 99% jistotou a pokračovat v léčbě pacienta. V kvantitativním způsobu stanovení infekce v odpovídajících sloupcích bude uvedena číselná hodnota zjištěných bakterií. Lékař může určit stupeň onemocnění a předepsat nezbytnou léčbu.

V některých případech, například při určování infekce HIV pomocí PCR, je-li výsledek záporný, je nutné provést další testy k potvrzení výsledků.

Kde provést analýzu?

Kde mohu provést analýzu PCR: ve státním polyklinickém nebo v soukromém laboratoři? Bohužel v obecních zdravotnických zařízeních jsou vybavení a metody často zastaralé. Proto je lepší upřednostnit soukromé laboratoře s moderním vybavením a vysoce kvalifikovaným personálem. Navíc v soukromé klinice získáte výsledky mnohem rychleji.

V Moskvě nabízí řada soukromých laboratoří analýzu PCR pro různé infekce. Například na klinikách jako Vita, Komplexní klinika, Šťastná rodina a Uro-Pro se provádí PCR analýza. Cena zkoušky je 200 rublů. pro definici jednoho patogenu.

Lze konstatovat, že diagnóza infekčních onemocnění metodou PCR je ve většině případů rychlou a spolehlivou metodou detekce patogenu v těle v časných stádiích infekce. Ale v některých případech stojí za to vybrat jiné metody diagnostiky. Potřeba provést takovou studii může stanovit pouze odborník. Dekódování analýzy PCR také vyžaduje profesionální přístup. Dodržujte doporučení lékaře a nevydávejte testy, které nejsou nutné.